Главная Биохимический анализ крови Методы исследования (для профессионалов медицины) Определение железа по цветной реакции со спиртовым раствором батофенантролина
Биохимический анализ крови - Методы исследования (для профессионалов медицины)

железоПринцип метода определения железа крови по цветной реакции со спиртовым раствором батофенантролина

Сывороточное железо восстанавливают тиогликолевой кисло­той, белки осаждают трихлоруксусной кислотой, в фильтрате устанавливают нужную величину рН, добавляя ацетат натрия, и проводят цветную реакцию с батофенантролином.

В связи с тем, что он в воде не растворяется, используют спиртовой раствор.

Необходимые реактивы для определения железа по цветной реакции 

1.   Кислота тиогликолевая, кислота трихлоруксусная, раствор 400 г/л.

2.   Натрия ацетат, насыщенный раствор (в случае необходимо­сти его очищают от следов железа, растворяя 500 г в 1 л воды при 37 °С). К прозрачной надосадочной жидкости добавляют раствор батофенантролина из расчета 10 мл на 1 л и этиловый спирт в ко­личестве, равном количеству надосадочной жидкости; на холоде выпадают кристаллы CH3COONa · ЗН2О.

3.   Батофенантролин, 40 мг в 100 мл этанола.

4.   НСl 1 н раствор.

5.   Калибровочный раствор железа: 100 мг мягкой железной проволоки растворяют в 4 мл концентрированной НС1 и разводят до 1 л водой, получается раствор, содержащий 100 мкг/мл. Из него разведением в 60 раз получают раствор, содержащий 30 мкмоль/литр (1,67 мкг/л).

Учитывая, что метод определения очень чувствительный, необходимо принять все меры, чтобы реактивы и посуда не со­держали железа, присутствие которого выявляется при постанов­ке холостых проб. Посуду, в том числе пробирки для взятия крови, необходимо обрабатывать разбавленной НС1; должна использо­ваться только деионизированная или перегнанная в стеклянной посуде вода; реактивы очищаются перекристаллизацией.

Ход определения железа по цветной реакции

К 0,7 мл сыворотки прибавляют 2 капли тиогликолевой кисло­ты, взбалтывают, а затем еще 0,35 мл 1 н НС1, опять перемешива­ют и прибавляют 0,2 мл раствора трихлоруксусной кислоты. Энергично размешивают стеклянной палочкой в течение 45 секунд, а затем центрифугируют при скорости 2500 об./мин. В пробирку с притертой пробкой отбирают из надосадочной жидкости 0,7 мл, к которым прибавляют 0,6 мл насыщенного раствора аммония ацетата и 0,7 мл раствора батофенантролина. Окраска развивает­ся за 20—30 секунд. Фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 1 сантиметр при длине волны 536 нм против холостой пробы, в ко­торой вместо сыворотки берут 0,7 мл воды. Одновременно обра­батывают и калибровочную пробу, в которой вместо сыворотки используют 0,7 мл калибровочного раствора, содержащего 30 мкмоль железа в 1 литре.

Расчет проводят по правилу пропорций.

P.S. Недавно купил себе планшет на android. Впечатлений море - очень удобно смотреть фильмы и гулять в интернете, лежа на диване. Много разных полезных програм и интересных игр. Очень радует, что операционная система - андроид. Можно свободно ставить любые программы и смотреть видео без конвертации. Еще один важный плюс - невцысокая, по сравнению с айпадом, цена.

 

Добавить комментарий

Защитный код
Обновить