Главная Биохимический анализ крови Методы исследования (для профессионалов медицины) Метод определения фосфора по образованию окрашенного комплекса малахитового зеленого с фосфорномолибденовой кислотой
Биохимический анализ крови - Методы исследования (для профессионалов медицины)

фосфорПринцип метода определения фосфора

Неорганический фосфор образует с молибденовой кислотой фосфорномолибденовую гетерополикислоту, которая, реагируя с основным красителем — малахитовым зеленым, дает зеленова­то-синее окрашивание.

Если фосфора нет, то малахитовый зеленый в кислой среде окрашен в желто-коричневый цвет. Белок не мешает проведению реакции, поэтому депротеинизацию не проводят, для обеспечения коллоидной устойчивости образовавшегося комплекса в раствор добавляется твин 20.

Необходимые реактивы для определения фосфора

1.   Малахитовый зеленый.

2.   Аммоний молибденовокислый.

3.   Цветной реактив — 1,5 г малахитового зеленого растворяют в 250 мл воды, одновременно растворяют 10,3 г молибденовокислого аммония в 250 мл 5 н НС1. Оба раствора смешивают, дают отстояться и фильтруют, за это время цвет реактива меняется.

4.   Твин 20, 1,5%-ный раствор — 0,15 мл твина 20 разводят 10 мл воды.

5.  Калибровочный раствор. Основной калибровочный раствор, содержащий 50 ммоль/литр, готовят, растворяя 702,2 мг однозамещенного кислого фосфата калия КН2РО4, высушенного при тем­пературе 120°С до постоянной массы, в 1 литре воды. Из него готовят калибровочный раствор, содержащий 20 мкмоль/литр.

Ход определения фосфора

0,02 мл сыворотки вносят в 1,5 мл воды, к раствору добавляют 2 мл цветного реактива и 1 каплю 1,5%-ного раствора твина. Че­рез 10—15 минут фотометрируют при длине волны 600—650 нм против холостого опыта, который ставят так же, как и основной опыт, но без сыворотки.

Для построения калибровочного графика берут 0,5; 1 и 1,5 мл рабочего калибровочного раствора, т. е. 10; 20 и 30 нмоль фосфо­ра, доводят объем до 1,5 мл, добавляют цветной реактив и раст­вор твина так же, как в основном опыте. Калибровочная проба, в которую взято 20 нмоль фосфора, по окраске соответствует опытной пробе, у которой взята сыворотка, содержащая фосфор в концентрации 1 ммоль/литр. Калибровочные пробы, в которые взято 10 и 30 нмоль, соответствуют сывороткам, содержащим 0,5 и 1,5 ммоль фосфора в 1 литр. По этим данным строится калиб­ровочная кривая, которая и используется для расчета.

Клиники Германии являются одними из самых популярных в отрасли медицинского туризма. Квалифицированные врачи, командная работа, большые диагностические возможности и широкий выбор препаратов делают ставят немецкие клиники на одну ступень с израильскими и швейцарскими. 

 

Добавить комментарий

Защитный код
Обновить