Главная Биохимический анализ крови Методы исследования (для профессионалов медицины) Унифицированный метод определения фосфора по восста­новлению фосфорно-молибденовой гетерополикислоты
Биохимический анализ крови - Методы исследования (для профессионалов медицины)

фосфорПринцип метода определения фосфора

Белки осаждают трихлоруксусной кислотой, в кислой среде фосфорная кислота образует с молибденовой кислотой фосфорно-молибденовую гетерополикислоту, которая восстанавливается эйконогеном с образованием ярко окрашенного молибденового синего.

Необходимые реактивы для определения фосфора

1.   Кислота трихлоруксусная, раствор 100 грамм/литр(10%-ный).

2.   Кислота серная 5 н.

3.   Аммоний молибденовокислый, 5%-ный раствор готовят, раст­воряя 5 г (NH4)6Mo7О, X 4Н2О в 100 мл 5 н серной кислоты.

4.   Натрий кислый сернистокислый NaHSО3 (в такой форме соль существует только в растворе, это скорее коммерческое, не­жели химическое, название). При кристаллизации выпадает пиросернистокислый натрий (Na2S2О5), который называют также метабисульфитом. Все 3 названия — бисульфит, пиросульфит и метабисульфит — синонимы. Препараты с этими названиями могут быть с равным успехом использованы для определеления фосфора.

5. Натрий сернистокислый безводный, сульфид натрия Na23

6.   Эйконоген, раствор. Растворяют полностью 6 г бисульфита натрия в 20—25 мл воды, вносят в этот раствор 0,1 г эйконогена (аминонафтолсульфоновой кислоты), который также должен пол­ностью раствориться, на что уходит некоторое время.

7.   Отдельно в небольшом объеме растворяют 1,2 г безводного сернокислого натрия, оба раствора смешивают, доводят объем до 50 мл, дают отстояться несколько часов и фильтруют.

8.   Калибровочный раствор. Основной калибровочный раствор, содержащий 50 ммоль фосфора в 1 литр, готовят, растворяя 702,2 мг высушенного до постоянной массы при температуре 120 °С однозамещенного фосфата калия КН2РО4 в 100 мл воды. Из него готовят рабочие калибровочные растворы, содержащие 1; 2 и 3 ммоль/литр. Для этого 1; 2 или 3 мл основного раствора доводят водой до объема 50 мл.

Ход определения фосфора

К 1 мл прибавляют 4 мл воды и 5 мл раствора трихлоруксус­ной кислоты, через 10 минут центрифугируют или фильтруют. К 5 мл безбелкового фильтрата добавляют 1 мл раствора молибденово-кислого аммония, 0,2 мл раствора эйконогена и 1,8 мл воды. Че­рез 20 минут фотометрируют при длине волны 630—690 нм в кюветах с длиной оптического пути 1 сантиметр против холостого опыта. Одновременно ставят холостой опыт, в который вместо исследуе­мой сыворотки добавляют воду, и калибровочные опыты, в кото­рые вместо сыворотки берут рабочие калибровочные растворы.

Расчет проводят по калибровочному графику или правилу пропорций.

Чувствительность метода можно значительно повысить, если после добавления эйконогена пробы нагревать в течение 7 минут на кипящей водяной бане и фотометрировать при длине волны 830 нм. В этом случае вместо 5%-ного раствора молибденового аммония берут 0,5%-ный раствор в 0,5 н серной кислоте, остальные реак­тивы те же. Согласно унифицированному методу окончатель­ный объем фотометрируемых проб составляет 8 мл. Если объем кюветы меньше, все дозировки можно пропорционально умень­шить.

P.S. Почему популярна ринопластика - узнать и понять легко, но понять почему человек делает несколько операций на носу одну за другой сложно. Не только самому врачу, но и, зачастую, пациенту. Нос - центр лица, от того как выглядит нос во многом зависит внешность. Но, в некоторых случаях пластические операции становятся навязчивой мыслью пациента. И в подобной ситуации необходима консультация психоаналитика. Некоторые зарубежные, да и отечественные клиники пластической хирургии проводят операцию по коррекции носа только после общения пациента с психологом. 

 

Добавить комментарий

Защитный код
Обновить