Главная Биохимический анализ крови Методы исследования (для профессионалов медицины) Метод определения кальция по цветной реакции с глиоксаль-бис-2-оксианилом
Биохимический анализ крови - Методы исследования (для профессионалов медицины)

кальцийПринцип метода определения кальция

Глиоксаль-бис-2-оксианил образует с кальцием в щелочной среде окрашенный комплекс красного цвета, интенсивность кото­рого пропорциональна концентрации кальция.

Необходимые реактивы для определения кальция

1.   Метиловый спирт (метанол), безводный.

2. Глиоксаль-бис-2-оксианил (ГБОА), 0,05%-ный раствор в метаноле, 50 мг препарата растворяют в 100 мл этанола (раствор нестойкий).

3. Боратный буфер рН 12,6 — растворяют в воде 10 г едкого натра (NaOH) и тетрагидроборатанатрия (Na2B4Oy х 10Н2О), объем доводят до 1 л в мерной колбе.

4. Ацетон.

Израильский бренд DEsHeli5. Смесь метанола и ацетона 9:1 (по объему).

    6.  Калибровочные растворы. Основной калибровочный раст­вор, содержащий 25 ммоль/литр Са, готовят, растворяя 100 мг карбо­ната кальция (СаСОэ) в 5 мл 1 н НСl и доводя объем раствора до 100 мл водой в мерной колбе. Из этого раствора готовят рабочие калибровочные растворы с концентрацией 1,5—3,5 ммоль/литр, от­бирая 6—14 мл в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводя объем водой до метки (приготовление аналогично методу, опи­санному в предыдущем методе, но без солей магния).

    Ход определения кальция

    К 1,5 мл боратного буферного раствора прибавляют 0,02 мл исследуемой сыворотки и через 1,5 минуты 0,5 мл 0,05%-ного раство­ра глиоксаль-бис-2-оксианила (ГБОА) в метаноле и еще через 1,5 мин 1 мл смеси метанола и ацетона. Фотометрируют точно через 5—10 минут после добавле­ния 0,05%-ного раствора глиоксаль-бис-2-оксианил (ГБОА) при длине волны 540—550 нм в кювете с длиной оптического пути 1 сантиметр против холостой пробы, в которую вместо исследуемой сыворотки берут воду. Одновре­менно ставят также калибровочную пробу.

    Расчет выполняют по калибровочному графику либо по пра­вилам пропорции.

    Глиоксаль-бис-2-оксианил (ГБОА) в щелочной среде распадается с образованием анилина и глиоксаля, который затем окисляется в глиоксалевую кислоту, способную образовывать комплексы с кальцием. Даже в растворе абсолютного метанола на протяжении нескольких недель реактив разрушается. Накапливающаяся глиоксалевая кислота в значи­тельно большей степени сказывается на экстинкции опытных, не­жели калибровочных, проб. Поэтому измерение оптической плот­ности должно проводиться в совершенно определенное время, причем при длине волны 540—550 нм показания стабильнее, чем при длине 530 нм, при которой наблюдается максимум пика.

     

    Добавить комментарий

    Защитный код
    Обновить