Главная Биохимический анализ крови Методы исследования (для профессионалов медицины) Унифицированный метод определения кальция по цветной реакции с крезолфталеинкомплексоном
Биохимический анализ крови - Методы исследования (для профессионалов медицины)

кальцийПринцип метода определения кальция

Крезолфталеинкомплексон образует с кальцием в щелочной среде комплекс красно-фиолетового цвета, интенсивность окрас­ки пропорциональна концентрации кальция. В реакционную смесь добавляют 8-оксихинолин, который связывает металлы, ме­шающие определению, но образует с кальцием менее прочный комплекс, чем крезолфталеинкомплексон.

Необходимые реактивы для определения кальция

1. Боратный буфер — 200 г борной кислоты (Н3ВОз, ортоборная кислота) растворяют при нагревании в 300 мл воды, добавляют 580 мл 5 н КОН, объем доводят водой в мерной колбе до 1 л, при температуре ниже 56°С из раствора могут выпадать кристаллы.

2. Глицин 2 моль/литр: 7,5 г глицина растворяют в 40 мл воды, пе реносят в мерную колбу и доводят объем до 50 мл, для консерва ции добавляют 2 капли хлороформа, хранят в холодильнике.

3. 8-оксихинолин (оксин), 1%-ный раствор: 500 мг препарата растворяют в 50 мл абсолютного спирта.

купить миноксидил4. Рабочий буферный раствор: к 300 мл воды добавляют 12,5 мл боратного буфера и 5 мл раствора глицина, перемешивают и уста навливают величину рН в пределах 10,5—10,6 с помощью 5 н КОН, добавляют 50 мл 1%-ного раствора оксихинолина, переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл и доводят до метки водой, после чего снова проверяют рН.

5. Крезилфталеинкомплексон, 0,1%-ный раствор: 10 мг крезолфталеинкомплексона растворяют в 100 мл основного буферно го раствора (при хранении в холодильнике реактив стоек не более 2-3 дней); калибровочный раствор. Основной калибровочный раствор, содержащий кальций в концентрации 25 ммоль/литр, готовят, растворяя 250 мг кальция карбоната (СаСО3) в 5 мл 1 н НСl. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и дово дят водой до метки. Для консервации добавляют 2 капли хлороформа. Одновременно готовят раствор соли магния 3 мг/мл, раст воряя 2,5 г хлорида магния (MgCl2 X 6Н2О) в 100 мл воды. Из этих растворов готовят рабочие калибровочные растворы со гласно таблице.

Ход определения кальция

К 3 мл рабочего раствора крезолфталеинкомплексона добавля­ют 0,05 мл исследуемой сыворотки, перемешивают.

Через 5 минут фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 0,5 сантиметра при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) против рабочего раствора крезолфталеинкомплексона. Одновре­менно обязательно ставят хотя бы одну калибровочную пробу. Расчет ведут по калибровочной кривой либо по правилу про­порций.

Определение кальция по цветной реакции

Основной калибро­вочный раствор

25 ммоль/л Са, мл

Раствор магния 3 мг/мл, мл

Вода, мл

Концентрация кальция, ммоль/л

6,0

1,0

до 100

1,5

8,0

1,0

до 100

2,0

10,0

1,0

до 100

2,5

12,0

1,0

до 100

3,0

14,0

1,0

до 100

3,5

Некоторые сорта стекла могут выщелачиваться, отдавая в раствор соли кальция, поэтому лабораторную посуду, особенно пробирки, желательно предварительно прокипятить в соляной кислоте. Опре­деление желательно проводить в сыворотке или в плазме, получен­ной из гепаринизированной крови, так как щавелевая, лимонная кислоты и другие антикоагулянты, связывающие кальций, могут помешать определению.

 

Добавить комментарий

Защитный код
Обновить